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dPCR（數(shù)字PCR）和qPCR（實時熒光定量PCR）是兩種在分子生物學研究中廣泛使用的核酸定量技術，它們之間存在一些顯著的區(qū)別。以下是對這兩種技術的詳細比較：
一、檢測原理
qPCR：
主要使用插入染料（如SYBR Green）或熒光探針（如TaqMan）來監(jiān)測整個擴增過程。
隨著PCR循環(huán)的進行，染料或探針的熒光強度逐漸增加，從而可以檢測到定量反應的DNA。
qPCR依賴于標準品制備的標準曲線來確定未知樣品的濃度，因此是一種相對定量的方法。
dPCR：
將一個樣本分成大量的微小反應單元（通常是微滴或微孔），每個單元包含一個或多個拷貝的核酸分子。
每個單元都進行PCR擴增，并檢測擴增產物的熒光信號強度。
根據(jù)泊松分布原理以及陽性反應單元的比例，可以計算出起始模板DNA的濃度，因此dPCR是一種絕對定量的方法。
二、檢測流程
qPCR：
包括DNA提取、配置qPCR反應體系、加入DNA模板、設置反應條件及PCR擴增、讀取結果等步驟。
通常需要使用標準品生成標準曲線，以進行未知樣品的定量。
dPCR：
檢測流程與qPCR類似，但更強調樣本的精確分割和反應單元的獨立性。
包括DNA提取、濃度檢測并稀釋、配置PCR反應液、上機檢測、PCR擴增和結果判讀等步驟。
dPCR的結果判讀通常依賴于對每個微小反應單元的熒光信號檢測，以及基于泊松分布的統(tǒng)計分析。
三、技術優(yōu)勢與特點
qPCR：
具有高度的敏感性和特異性，能夠實現(xiàn)多重反應和自動化檢測。
實時熒光檢測模式功能強大，具備定性、定量、突變檢測等多種功能。
技術成熟，有大量商業(yè)化產品可供選擇，且價格相對較低。
更適合高通量分析，動態(tài)范圍寬。
dPCR：
準確度與精密度高，較少受到擴增效率的影響。
絕對定量，不需要標準品或標準曲線，直接計算樣品中目的核酸分子的個數(shù)。
抗干擾能力強，對抑制劑的抵抗能力高，適用于復雜樣本的檢測。
在微小差異面前表現(xiàn)優(yōu)秀，能夠鑒別差異小于20%的拷貝數(shù)。
四、應用場景
qPCR：
廣泛應用于病原體檢測、基因表達分析、遺傳病診斷等領域。
在高通量篩選和大規(guī)模實驗中具有優(yōu)勢。
dPCR：
適用于需要高精度和高靈敏度的實驗，如稀有突變檢測、基因拷貝數(shù)變異分析、無創(chuàng)產前檢測（NIPT）等。
在復雜樣本和抑制劑存在的情況下表現(xiàn)出色。
dPCR和qPCR在檢測原理、檢測流程、技術優(yōu)勢與應用場景等方面存在顯著差異。研究人員應根據(jù)實驗需求、樣本類型和實驗條件等因素，選擇合適的技術進行核酸定量研究。
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