污染的DNA、RNA和DNA酶、RNA酶對于采用高靈敏PCR技術(shù)的實驗室來說,并非小問題。最初來自氣溶膠的DNA和RNA片段,可導致樣品間的交叉污染,造成結(jié)果不準確和假陽性。然而,來自樣品、PCR管、吸頭、移液器和設(shè)備的DNA和RNA沒有得到重視,直到在PCR中發(fā)現(xiàn)污染。因此,有必要采用有效的Lab Clean™,對實驗室設(shè)備、任何表面和地面進行清潔,以避免污染擴散,以獲得可靠的實驗結(jié)果。
長期以來,細菌和酵母中的人工染色體一直是合成生物學家用來編寫和重寫基因組的載體。哺乳動物系統(tǒng)受限于有限的染色體工具。在人類人工染色體(HACs)被開發(fā)出來的四分之一個世紀之后,科研人員開發(fā)了一種不受控制的多聚化的解決方案,這種解決方案伴隨著先前的版本。它們的HAC約為750千堿基,比以前的HAC大得多,足以容納通過細胞分裂遺傳所需的著絲粒上的多域染色質(zhì)。隨著細胞傳遞方法的簡化,這些發(fā)展為推進哺乳動物和許多其他真核生物的染色體工程提供了手段。
相關(guān)研究發(fā)表在《Nature》上,文章標題為:“Efficient formation of single-copy human artificial chromosomes"。
大型DNA組裝方法是合成原核生物和芽殖酵母染色體的里程碑式成就的基礎(chǔ)。出芽酵母通過約125堿基對DNA序列定義的著絲??刂迫旧w遺傳,而哺乳動物和許多其他真核生物則使用較大的表觀遺傳著絲粒。利用著絲粒表觀遺傳學允許人類人工染色體(HAC)的形成,但不足以避免初始DNA分子在引入細胞后猖獗的多聚化。我們描述了一種有效地形成單副本HACs的方法。它采用了一個約750千堿基的結(jié)構(gòu),這個結(jié)構(gòu)足夠大,可以容納存在于內(nèi)部和外部著絲粒上的不同染色質(zhì)類型,從而避免了多聚化的需要。通過使用酵母球質(zhì)體融合,使哺乳動物細胞的遞送流線型。這些進展允許在后生動物細胞的背景下進行忠實的染色體工程。