常規(guī)PCR法介紹

常規(guī)PCR法：是根據(jù)支原體核糖體16s-23s rRNA的特異保守序列設計引物，對待檢樣本DNA進行擴增，通過對擴增產(chǎn)物的大小分析作出診斷。

優(yōu)點：①靈敏度高，特異性好。②時間短，2-3小時出結(jié)果。③符合歐洲藥典。④操作簡單。

缺點：①對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結(jié)果會出現(xiàn)假陽性。（可用培養(yǎng)法做補充驗證）。②不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大（由于引物及內(nèi)在設計不同），需謹慎選擇，盡量在專業(yè)人員推薦指導下使用。

『支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒』介紹

德國MB公司生產(chǎn)的支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒，依據(jù)操作步驟的細微差別，分一步法和經(jīng)典法兩類。此兩類試劑盒較其他廠家同類產(chǎn)品，具有以下的優(yōu)點：

①高特異性，270bp左右的一條陽性對照條帶，涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種，操作簡單，結(jié)果易于觀察。（使用MB的試劑盒，下表列出的支原體物種均為陽性，其他微生物或真核細胞均為陰性。根據(jù)16s rRNA序列的同源性比對，該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無膽甾原體和85種支原體。）

②高靈敏度，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。

③試劑盒含內(nèi)控對照，可防止假陰性的發(fā)生。

④符合歐洲藥典要求。

適用范圍

<!--[if !supportLists]-->A. <!--[endif]-->科研用戶，細胞上清的篩查可選用MB公司生產(chǎn)的支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒（一步法）。（詳見下文）

【Venor® Gem OneStep (貨號:11-8050)】或【Venor® Gem Advance (貨號: 11-7096)】

B. 對于需遵循藥典要求的生物制藥企業(yè)，可選用MB公司生產(chǎn)的支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒（經(jīng)典法）。

【Venor® Gem Classic(貨號: 11-1050) 】+ Taq酶 (貨號: 53-1050)】

或【Venor® Gem Classic (貨號: 11-1050G)】

特點

1. 內(nèi)控對照已加在預混液中，無需另外配置，使用便捷。

2.高特異性，僅一條陽性對照條帶，即可涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種。

操作簡單，易于觀察。

3.高靈敏度，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。

4.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無膽甾原體和85種支原體。

操作步驟

下列圖示以Venor® Gem OneStep支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒(一步法)( 貨號：11-8050) 為例，具體產(chǎn)品操作以說明書為準。

191bp為內(nèi)控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對照條帶會完QUAN消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結(jié)果。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ê完幮詫φ障啾龋?，此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

儲存條件

2~8℃至少12個月。復溶后必須在-18℃保存。

效期

1年6個月

(締一生物)

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