要進行細胞生長曲線的測定,來反映FBS的功能,需要先準(zhǔn)備足夠的有活力的細胞。締一生物/締一生物根據(jù)美國藥典(USP)的描述分析如何準(zhǔn)備用于生長促進曲線測定的細胞。
用37℃水浴快速解凍一管FBS。計數(shù)細胞并觀察活力。用添加FBS的*培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)細胞,具體遵循ATCC對相應(yīng)細胞提供的指導(dǎo)。鏡下觀察,保證細胞均一分布,貼壁或懸浮接近長滿。細胞再傳代,直至培養(yǎng)的細胞數(shù)足夠用于檢測(總細胞數(shù)需要1X107個,活力大于90%)。
收獲細胞時,先棄掉上清,用不含F(xiàn)BS的培養(yǎng)基沖洗;對貼壁細胞,加1 mL of Trypsin/EDTA消化,必要時用1ml不低于10%FBS的培養(yǎng)基中和。離心,棄上清,細胞重懸。此時,細胞即可用于接種。
接種細胞時,應(yīng)測試*的接種密度,起始密度范圍為2×103~2×104活細胞/mL。選取至少5個時間點,3個復(fù)孔,以確定細胞*接種密度。在37℃,5%CO2的培養(yǎng)箱孵育。對7天內(nèi)的每個時間點的培養(yǎng)細胞進行拍照(第0,1,2,3,4,7天)。應(yīng)采用待測試的血清和USP的參考血清,測試三種血清濃度。記錄下每種條件下細胞的匯合度。在預(yù)定的時間點上收獲細胞。對細胞總數(shù)和活力進行計數(shù)。
綜上所述,您是不是已經(jīng)對如何準(zhǔn)備用于生長促進曲線測定的細胞,有所了解。如果還有其他疑問,請咨詢締一生物/締一生物資深專家。